Evaluación de la fertilidad y caracterización molecular de los procesos inflamatorios endometriales en burras utilizando inseminación artificial con semen congelado.

Resumo

La producción de burros (Equus asinus) está generando interés científico y tecnológico como animales productores de leche para consumo humano. Los resultados in vitro obtenidos congelando semen de burro han sido satisfactorios, pero al momento de inseminar burras, las tasas de preñez son significativamente más bajas (0-36%) que cuando se utiliza para inseminar yeguas (33-53%). El objetivo de este proyecto es estudiar las causas de subfertilidad en burras inseminadas con semen congelado, mediante la caracterización de los procesos inflamatorios del endometrio con técnicas de diagnóstico molecular. La hipótesis de trabajo es que la inseminación con semen congelado produce una endometritis persistente en las burras debido a un desbalance entre los mecanismos de respuesta inflamatoria frente a los espermatozoides dañados por la criopreservación en ausencia de plasma seminal (PS), lo que conduce a la subfertilidad. Se utilizarán eyaculados provenientes de 4 burros de raza Catalana, adultos, sanos y de fertilidad probada, que se encuentran alojados en las instalaciones del Campo Escuela Unidad Didáctica Experimental y Productiva (UDEP) Dr. Hugo Roberto Alvarez, de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Pampa (FCV UNLPam). El semen se centrifugará, se descartará el sobrenadante y el pellet se diluirá a una concentración de 200×106 espermatozoides viables/ml en un medio con Equiplus (Minitube), 5% de dimetilformamida y 2% de yema de huevo. Se identificarán los siguientes tratamientos: 1) Control, sin agregado de PS homólogo (0% PS); 2) Grupo 10: con agregado de 10% PS homólogo; y 3) Grupo 20: con agregado de 20% de PS homólogo. Se empaquetará en pajuelas de 0,5 ml que se someterán a una curva de refrigeración y congelación, y se conservarán en nitrógeno líquido (-196 °C) hasta su uso. Se tomarán datos del semen posdesconglado como motilidad total y progresiva mediante sistema CASA (computer asisted sperm analysis), evaluación de la integridad de la membrana plasmática mediante el test hipoosmótico y relación de vivos/muertos con tinción de eosina/nigrosina. Para evaluar el efecto sobre la inflamación en el endometrio, se inseminarán burras post ovulación en el fondo del cuerno uterino, y se tomarán muestras del endometrio mediante pinza Wittner a las 24 horas post inseminación. Estas muestras se conservarán a -80 °C hasta su uso. A su vez, se diagnosticará la presencia de vesícula embrionaria a los 14 días post inseminación mediante ecografía transrectal para determinar fertilidad. Hasta el momento, se encuentran almacenadas las muestras de semen congelado y de endometrio. El siguiente paso será analizar los parámetros del semen pos descongelado y analizar la expresión de citoquinas pro y antiinflamatorias (interleuqiunas 1β, 6, 8, 10 y factor de necrosis tumoral α), mediante qPCR. Este proyecto pretende clarificar determinados eventos reproductivos que generan infertilidad o baja eficiencia reproductiva al momento de utilizar semen congelado.