Efecto de la proteína anticongelante Anti-Freeze Protein tipo III sobre la calidad del semen porcino criopreservado: La centrifugación refrigerada como método de concentración sobre la calidad del semen porcino

Abstract

La concentración de semen mediante la técnica de centrifugación es uno de los primeros pasos en los protocolos de criopreservación, por lo que el menor daño que se ejerza sobre los espermatozoides (esp.) en este proceso resulta de fundamental importancia para los pasos ulteriores. Asimismo, se desea obtener en cada dosis el mayor número de esp. viables con acrosomas intactos. El propósito de este trabajo fue evaluar el efecto de diferentes protocolos de centrifugación refrigerada como técnica de concentración sobre la calidad espermática, con el fin de estandarizar un protocolo de criopreservación. Para ello, durante los meses de abril a diciembre de 2018, se analizaron n = 13 muestras de semen, obtenidas mensualmente mediante la técnica de mano enguantada, provenientes de tres verracos pertenecientes a la FCV-UNLPam. Se consideraron aceptables aquellos eyaculados que tuvieran >200×10⁶ esp/mL, >60% de esp.mótiles y > 60% de esp. morfológicamente normales. Se evaluaron tres protocolos de centrifugacióna 15 °C: 2400 Xg por 3 minutos (C1), 2400 Xg por 10 minutos (C2) y 1500 Xg por 10 minutos (C3). Las variables analizadas antes (SC) y después de C1, C2 y C3, fueron: i) Concentración espermática (10⁶ esp/mL), determinada mediante SpermaCue; ii) % de esp.con motilidad progresiva (MP), en microscopio de contraste de fases (400x) a 37 °C; iii) % de esp. morfológicamente normales, por el método de tinción húmeda en BSF; y iv) % esp. con integridad acrosomal, ambos utilizando microscopio con contraste de fases DIC - Nomarski a 1000x.Las variables con distribución normal se analizaron mediante la prueba de ANOVA. Las variables cuya distribución no se ajustó a la normalidad se analizaron con la prueba de Kruskal-Wallis. Los valores se expresan como Media ± EEM, considerándose diferencias significativas cuando P < 0,05.Encontramos que los tres protocolos de centrifugación aumentaron la concentración respecto del semen SC (SC: 520,58 ± 55,67; C1: 1625,00 ± 46,20; C2: 1597,27 ± 49,42; C3: 1593,64 ± 41,00; P < 0,001), sin alterar el % de esp. morfológicamente normales (P = 0,773) ni el % de esp. con integridad acrosomal (P = 0,136). Sin embargo, se registraron diferencias en el % de esp. con MP obtenida luego de la centrifugación (SC: 77,83±1,89; C1: 69,58±1,89; C2: 72,27 ± 1,95; C3:68,64± 1,36;P= 0,003). Al analizar estas diferencias con el postest de Bonferroni, C2 fue el único que no disminuyó el % de esp. con MP (P = 0,208). Por lo tanto, podemos concluir que si bien ninguno de los protocolos de centrifugación modificó el % de esp. con morfología normal y en especial el % de esp. con acrosomas normales, solo uno de ellos parecería no afectar el % de esp. con MP. Por lo tanto, 2400 X g a 15 °C por 10 minutos no afectaría la calidad seminal.