Presencia de Leptospiras en ecosistemas acuáticos de la región noreste de la provincia de La Pampa.

Resumen

La leptospirosis es una zoonosis reemergente causada por bacterias del género Leptospira. El cambio climático, la urbanización y el saneamiento inadecuado han llevado a convertirse en un problema latente para cualquier población. En nuestro país es frecuente la ocurrencia de brotes estacionales después de inundaciones, las cuales llevan al contacto con agua y suelos contaminados con orina de animales domésticos y silvestres. El género Leptospira se ha dividido en tres grupos filogenéticos: patógenas, intermedias y no patógenas. Se encuentra en estudio el rol que juegan las especies de patogenicidad intermedia. El objetivo de este trabajo es determinar la presencia de leptospiras en aguas ambientales de la región noreste de la provincia de La Pampa mediante el cultivo y posterior identificación de leptospiras con el uso de técnicas de PCR y qPCR. Hasta el momento se procesaron 71 muestras de agua (41 de canales pluviales y 30 de humedales), desde septiembre de 2021 a febrero de 2024, registrándose meses con muy pocas precipitaciones, incluyendo valores de lluvias acumuladas por debajo de los mínimos notificados en los últimos años. Las muestras de agua procesadas se sembraron en Fletcher con 5-fluorouracilo (200 μg/ml) y Neomicina (10μL/mL), se incubaron 180 días a 28-30°C y se observaron mediante microscopía de campo oscuro. Se recuperaron espiroquetas en el 12,7% (n=9) de las muestras. A partir de los cultivos positivos, se realizó la extracción de ADN utilizando un kit comercial. Para la detección de leptospiras patógenas se realizó una qPCR que detecta la presencia del gen lipL32, utilizando los oligonucleótidos LipL32F y LipL32R. Luego se llevó a cabo una PCR convencional específica de género para Leptospira spp. a través de la amplificación de un fragmento del gen 16S rARN (rrs) y la utilización de los oligonucleótidos LeptoA y LeptoB. Los productos de PCR amplificados se purificaron y se acondicionaron de acuerdo a los requerimientos solicitados por el laboratorio de secuenciación (Macrogen, Seoul, South Korea). Los resultados obtenidos se analizaron con el programa Clustalw (https://www.genome.jp/tools-bin/clustalw). Las secuencias obtenidas fueron comparadas con las incluidas en la base de datos BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Ninguna de las espiroquetas recuperadas fue detectada como leptospiras del grupo patógenas. Se pudo confirmar que todas pertenecen al género Leptospira, identificándose como: Leptospira ellinghausenii/Leptospira yanagawae/Leptospira meyeri (95-100% identidad) (n=5), Leptospira idonii (93-97%) (n=2), Leptospira vanthielii (100%) (n=1) dentro del grupo saprófitas, y Leptospira fainei (95%) (n=1), dentro del grupo intermedia. La temperatura de las muestras positivas osciló entre 14,5 y 30°C y el pH entre 6 y 8. Son escasos los reportes de aislamientos de leptospiras intermedias en nuestro país y aún no se han detectado en poblaciones animales. En otros países se ha aislado L.fainei en pacientes humanos enfermos con síntomas asociables con leptospirosis y se ha demostrado que puede localizarse en los testículos y epidídimos de ejemplares de jabalí y en cerdos domésticos, pudiendo intervenir en el éxito reproductivo. El estudio de las leptospiras intermedias podría explicar los casos subclínicos, y en aquellos que no llegan a un diagnóstico de confirmación deberían implementarse herramientas adecuadas para su detección.